文章摘要:为获得草铵膦完全抑制蛹虫草生长的最小浓度和一种快速构建Bar基因双元载体的方法，本文首先采用浓度梯度法研究草铵膦对蛹虫草的抑制效果，其次采用双接头PCR（DJ-PCR）构建Bar基因表达盒，然后分别采用T4 DNA连接酶法和同源重组法把Bar基因表达盒插入双元载体pAg1-H3的T-DNA区域，以构建Bar基因双元载体pAg-Bar，并比较T4 DNA连接酶法和同源重组法的连接效果，最后通过农杆菌介导转化法来验证载体pAg-Bar的有效性及Bar基因在蛹虫草中的功能。结果表明：草铵膦完全抑制蛹虫草分生孢子生长的最小质量浓度为400 μg/mL；采用DJ-PCR方法可快速构建Bar基因表达盒；采用T4 DNA连接酶法和同源重组法均可实现双元载体pAg-Bar的构建，而同源重组法更快速、高效；采用农杆菌介导转化法可把双元载体pAg-Bar中的Bar基因表达盒整合入蛹虫草的基因组，使蛹虫草转化子具有草铵膦抗性。本研究建立的载体构建方法具有快速、高效的特点，适用于抗性基因载体、敲除载体、超表达载体等载体的构建，为蛹虫草基因功能的鉴定提供技术支撑。

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